"Microenvironnement des Cellules Souches Hématopoïétiques en conditions oxydatives contrôlées " Colette Bastié - direction : Florence Bonnin & Chantal Pichon (CBM Orléans) La production permanente de cellules sanguines est essentielle tout au long de la vie d’un organisme mais aussi dans certaines applications cliniques. Elle est assurée par les cellules souches hématopoïétiques (CSH) qui sont présentes dans la moelle osseuse au contact des cellules stromales mésenchymateuses (CSM) dans la niche ostéoblastique. Le rôle des CSM est essentiel pour le soutien de l’hématopoïèse. Dans ce projet, nous voulons créer un modèle de microenvironnement médullaire contrôlé, en utilisant des CSM modifiées ayant une capacité renforcée de soutien de l’hématopoïèse humaine ex vivo. Pour cela nous allons utiliser un système original d’intégration non virale du transgène dans des cellules stromales primaires et en lignées, en utilisant des vecteurs dérivés du transposon piggyBac. La vectorisation du transgène d’intérêt ici la glutathione péroxidase 3 qui est une enzyme du métabolisme oxidatif dans les CSM se fera en collaboration avec l’équipe UPR4301 d’Orléans, par vectorisation physique (sonoporation). Ce système servira de modèle pour le transfert de gènes dans les CSM en vue d'une utilisation en thérapie cellulaire. Nicole Ishac - direction : Florence Bonnin Dans ce projet, nous voulons créer un microenvironnement médullaire contrôlé, en utilisant des cellules souches mésenchymateuses (CSM) médullaires modifiées, capables de soutenir efficacement l’hématopoïèse humaine ex vivo. Pour cela, nous allons transformer de manière stable des CSM humaines, pour qu’elles expriment une enzyme du métabolisme oxydatif, la glutathione péroxidase 3 (GPX3) sous une forme native, hyperactive, mutante ou non sécrétée. La transformation de ces cellules, nous amènera à valider un système original d’intégration contrôlée d’un transgène dans des cellules stromales primaires et en lignée, en utilisant des vecteurs non-viraux dérivés des transposons. Cette solution d’intégration est essentielle au projet pour développer des cellules stromales modifiées et « sécurisées » que l’on utilisera comme cellules usines capables de produire une molécule d’intérêt. Ce système nous permettra d’étudier l’impact du métabolisme oxydatif contrôlé par GPX3 et des voies de signalisation associées sur le soutien de l’hématopoïèse humaine. "Rôle et régulation du facteur XPC dans les cellules leucémiques" Hassan Dakik - direction : Frédéric Mazurier Les systèmes de réparation de l’ADN sont garants de l’intégrité du génome cellulaire. Des anomalies dans ces mécanismes sont parfois impliquées dans les cancers. Nous étudions la réparation par excision des nucléotides (NER) dans le développement/progression leucémique. Les patients déficients en xeroderma pigmentosum du groupe C (XPC), un facteur important du système NER, présentent un risque accru de développer des cancers. La modulation de l’expression de XPC pourrait prédisposer et/ou participer à l’évolution de la leucémie et à sa réponse au traitement. Les cellules épithéliales cutanées, déficientes en XPC, présentent une activation du stress oxydatif, une modification du métabolisme énergétique et l’apparition de mutations conduisant à l’apparition de tumeurs. En bloquant l’activation du stress, nous avons inhibé la carcinogenèse. L’extinction de XPC modifie aussi la croissance des cellules leucémiques conférant un cycle cellulaire plus rapide. Nous étudierons les changements dans le métabolisme oxydatif et l’agressivité. Nous testerons l’impact de la modulation de la production des ROS par surexpression des enzymes anti-oxydantes ou par inhibiteurs chimiques in vitro et in vivo sur la croissance et l’agressivité des leucémies. La dérégulation du métabolisme oxydatif via XPC dans les cellules de la niche leucémique et ses conséquences sur la croissance tumorale seront aussi étudiées. |